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概述:

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng):是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量,以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析,它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。PCR的最大特點(diǎn),是能將微量的DNA大幅增加。因此,無(wú)論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液,只要能分離出一丁點(diǎn)的DNA,就能用PCR加以放大,進(jìn)行比對(duì)。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。

原理:

pcr主要是用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA片段,類似于天然DNA的復(fù)制過(guò)程。以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板,以一對(duì)分別與模板5’末端和3’末端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成,重復(fù)這一過(guò)程,即可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。

應(yīng)用:

PCR在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中最有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)域就是對(duì)感染性疾病的診斷。理論上,只要樣本有一個(gè)病原體存在,PCR就可以檢測(cè)到。一般實(shí)驗(yàn)室也能檢出10~100基因拷貝,而目前病原體抗原檢測(cè)方法一般需要105-7個(gè)病原體才可檢測(cè)到。PCR對(duì)病原體的檢測(cè)解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題,可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。

癌基因的表達(dá)增加和突變,在許多腫瘤早期和良性的階段就可出現(xiàn)。PCR技術(shù)不但能有效的檢測(cè)基因的突變,而且能準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量,可據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。

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